引物延伸法是检测SNP的方法,操作步骤从准备样品和试剂开始,将下列步骤排序。 a.样品DNA变性
B、根据SNP位点设计特异引物,其中一条链(特异链)的3′末端与SNP位点的碱基互补(或相同),另一条链(普通链)按常规方法进行设计,因此,AS-PCR技术是一种基于SNP的PCR标记。因为特异引物在一种基因型中有扩增产物,在另一种基因型中没有扩增产物,用凝胶电泳就能够很容易地分辨出扩增产物的有无,从而确定基因型的SNP
C、杂交测序方法,即通过与一组已知序列的核酸探针杂交进行核酸序列测定的方法,在一块基片表面固定了序列已知的靶核苷酸的探针。当溶液中带有荧光标记的核酸序列TATGCAATCTAG,与基因芯片上对应位置的核酸探针产生互补匹配时,通过确定荧光强度最强的探针位置,获得一组序列完全互补的探针序列
D、是将变性的单链PCR产物通过与硅芯片上的化合物共价结合后,在硅芯片上进行引物的退火,延伸反应,突变部位配对的碱基与正常配对的碱基不相同。根据引物在延伸反应中所结合的不同碱基的不同质量在质谱仪上显示不同峰而检测SNP
E、目标核酸片段PCR扩增,部分加热变性后,含有突变碱基的DNA序列由于错配碱基与正常碱基不能配对而形成异源双链。因包含错配碱基的杂合异源双链区比完全配对的同源配对区和固定相的亲和力弱,更易被从分离柱上洗脱下来,从而达到分离的目的。SNPs的有无最终表现为色谱峰的峰形或数目差异,依据此现象可很容易从色谱图中判断出突变的碱基
下列每种试剂均可用来检测SNP多态性。相对于检测所用的探针而言,多态性区域位于何处? (1)等位基因特异性的寡聚核苷酸(ASO)。 (2)引物延伸寡聚核苷酸。 (3)RFLP探针。
A.碱基与特殊染料间不同的相互作用
B.一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
C.限制性位点与DNA末端标记的相关性
D.可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
E.反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤,也节约了开支
有两种确定核酸中核苷酸序列的方法:化学序列分析法(Maxam-Glbert)和酶学序列分析法(Sanger)。酶学测序法的优点是
A.碱基与特殊染料间不同的相互作用
B.一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
C.可同时对DNA双螺旋的两条链进行测序
D.限制性位点与DNA末端标记的相关性
E.反应是DNA特异的,RNA不会带来干扰。这样既减少纯化步骤,也节约了开支
A.仍与引物Ⅰ结合进行DNA子链的延伸
B.与引物Ⅱ结合进行DNA子链的延伸
C.同时与引物Ⅰ和引物Ⅱ结合进行子链的延伸
D.无需与引物结合,在酶的作用下从头合成子链
A.免揉搓护理液的出现使揉搓的步骤可以从护理液的操作流程中彻底去掉了
B.加热消毒法是目前最为普遍的消毒方法
C.揉搓加冲洗可去除镜片上99%的微生物
D.镜片上的蛋白沉淀物可通过护理全部清除
A.直接获取序列,分型的金标准,可发现未知突变
B.通量低,不能检测突变比例小于30%的SNP
C.适用于各种SNP的检测、未知突变的筛查
D.可以检测突变比例小于30%的SNP
E.适用于验证其他分型的结果
A.以双脱氧底物取代正常底物
B.碱基与特殊染料间不同的相互作用
C.一个合成引物的延伸和DNA修复合成的可靠终止
D.反应是DNA特异的,RNA不会干扰
从基本方法延伸出来的或与基本方法配合才能使用的成本计算方法是成本计算的()。
(A) 基本方法
(B)辅助方法
(C) 约当产量法
(D) 定额比例法