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[主观题]

克隆基因分析发现:一个含有转录位点上游3.8 kb DNA的克隆,其mRNA的直接转录活性比仅含有3.1 kb上

游DNA克隆的转录活性高50倍。请解释这个实验结果。

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第1题
c-fos基因是FBJ鼠骨肉瘤病毒所携带的癌基因的细胞内同源基因。它的功能未知,c-fos的激活是对于生长因子的最
早的转录反应之一。在小鼠细胞中,c-fos的转录水平在5min内显著增加,在10~15min时达最大值之后突然下降。为了研究人类c-fos基因的瞬时诱导的机制,可以克隆一个DNA片段,它含有全长的转录单元,这个转录单元起始于转录起始点上游-750bp处,终止于+1.5kb的poly(A)加入位点(图13-3-60(1)A)。当把这个克隆转至小鼠细胞中时(我们可以较为容易区分克隆与内源性c-fos基因的mRNA),一天后加入血清(富含生长因子)刺激细胞生长。你发现同样的瞬时诱导(图13-3-60(2)A)。尽管与小鼠基因相比,时间上有略微的延长。

通过分析一个类似增强子元件(SRE血清反应元件)的一系列缺失突变体,发现在转录起始点上游的300核苷酸序列对于在加入血清后增强转录是必需的。通过建立包含有人β-球蛋白部分基因(它编码一个极为稳定的mRNA)的各种杂交基因来研究c-fos mRNA的稳定性。球蛋白基因的结构和两种杂交基因如图13-3-60(1)B、C、D所示。在低血清浓度下,当杂交基因转染鼠细胞时,24小时后它才对血清作出反应(图13-3-60(2)B、C所示)。

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第2题
某种长3 kb的质粒带有一个氨苄青霉素抗性基因和一个四环素抗性基因,该质粒含有下列酶的单一位点:
EcoRⅠ、BglⅡ、HindⅢ、PstⅠ、SalⅠ。如果DNA克隆到EcoRⅠ位点,两种基因抗性都不受影响;DNA克隆到.BglⅡ、HindⅢ或SalⅠ位点,会破坏四环素抗性;DNA克隆到PstⅠ位点,会破坏氨苄青霉素抗性。用限制酶完全切割该质粒,得到以下结果:

某种长3 kb的质粒带有一个氨苄青霉素抗性基因和一个四环素抗性基因,该质粒含有下列酶的单一位点:Ec(1)画出该质粒的酶切图谱,标明抗性基因的位置和酶切位点。 (2)如用HindⅢ切割未标记的上述DNA片段,得到5.5 kb和2.5 kb两段。如果在EcoRⅠ的3.5 kb酶切片段上没有HindⅢ切点,则用双酶(EcoRⅠ+HindⅢ)切割后会得到什么样的片段?

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第3题
TFⅢA是5S rRNA基因表达所需的转录因子,这个蛋白含有9个锌指结构域,与5S rRNA基因内的一段序列和5
S rRNA本身结合。 (1)如何定位TFⅢA蛋白的DNA结合位点? (2)什么样的突变可以证明锌指是DNA结合所需要的? (3)有人发现TFⅢA C端缺失19个氨基酸后与DNA结合的能力与野生型一样,但是不能激活5S rRNA基因的转录,解释其中的原因。

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第4题
真核生物基因转录的调节区位于转录起始位点上游,调控因子直接对RNA聚合酶起作用。 ()此题为判断题(对,错)。
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第5题
TFⅢA是5S rRNA基因表达所需的转录因子。该蛋白含有9个锌指结构,与5S rRNA基因内的一段序列和5s rR
NA本身结合。(1)如何定位TFⅢA蛋白的DNA结合位点?(2)什么特异的突变体可以确定锌指是DNA结合所需的?(3)TFⅢA的C端缺失19个氨基酸后与DNA结合能力与野生型相同,但是不能激活5S rRNA基因的转录,是什么原因?(4)爪蟾卵母细胞中合成并储存了大量的5s rRNA。随着5s rRNA的积累,TFⅢA与之结合,这对5S rRNA基因的转录有什么影响?调控该过程的机制是什么?

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第6题
组蛋白H2A基因在所有的细胞中都进行表达,而免疫球蛋白基因只在淋巴细胞中表达。两类基因的启动子
都含有转录因子Oct-1的结合位点,Oct-1也存在于这两类细胞中,但为什么免疫球蛋白只在淋巴细胞中表达?

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第7题
酵母U6 sRNA基因有一个TATA框位于上游,在基因内有一个弱的A框,基因下游的远端还有一个保守的B框。体外实验时
,RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ都可以转录这个基因,但体内实验发现只有RNA聚合酶Ⅲ可以转录它。如何确定该基因启动子的聚合酶特异性?
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第8题
下列关于基因表达的叙述,正确的是()

A.转录时,RNA聚合酶的识别位点在RNA分子上

B.mRNA上含有tRNA的结合位点

C.核苷酸序列不同的基因,表达出的蛋白质一定不同

D.转录从基因的特定位点开始,到终止密码子结束

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第9题
在对rFG1的启动子的定位中,发现转录起始位点上游邻近区域的缺失会影响转录水平。这个结果说明了YFG1转录的什
么特征?下一步会做什么实验?
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第10题
由酵母交配型基因座产生的关键调控蛋白之一是一个抑制蛋白,称做α2。在可交配型的单倍体细胞中,α2对于关闭一

由酵母交配型基因座产生的关键调控蛋白之一是一个抑制蛋白,称做α2。在可交配型的单倍体细胞中,α2对于关闭一系列涉及到交配型特异性的基因是必需的。在α2二倍体细胞中,α2抑制物同α1基因产物协同作用,关闭了除α特异性基因外的一系列单倍体特异性的基因。两类有区别又相互关联的保守DNA序列在这两套控制基因的上游被发现,一个在单倍体特异性基因前,另一个在α特异性基因前。根据这些上游序列的相关性,很有可能α2与两者都结合。然而,它的结合特性在它能识别单倍体特异性基因前必须通过α1蛋白以某种方式进行修饰。至此,这种修饰作用的本质是什么?α1是能催化α2的共价修饰,还是能与α2结合而修饰α2蛋白?

为了认清这些问题,要做三个实验。首先,在单独作用和共同作用两种方式下,测定α1和α2与两种上游调控DNA位点的结合(图13-3-50所示)。α1单独不能同含有任何调控位点的DNA片段结合。然而α2虽能与α专一性片段结合,但是不能同单倍体专一性片段结合。α1和α2的混合物同两者都能结合。

由酵母交配型基因座产生的关键调控蛋白之一是一个抑制蛋白,称做α2。在可交配型的单倍体细胞中,α2对于

在第二个实验中,大量的含α专一性序列的未标记DNA加入到α1和α2蛋白的混合物中。在这样的条件下,单倍体专一性片段仍被束缚。同样,如果加入过量的含有单倍体专一性片段的未标记DNA到混合物中,α专一性片段仍然被束缚。

在第三个实验中,改变不同的α1和α2的比例,当α2过量时,同单倍体专一性片段的结合减弱,而当α1过量时,同α专一性片段的结合减弱。

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