为了构建重组质粒pZHZ2,可利用限制酶E、F切割目的基因和质粒pZHZ1,然后用相应的酶连接下列叙述中错误的是()
A.基因工程的核心就是构建重组DNA分子
B.质粒pZHZ2上存在RNA聚合酶结合的位点
C.重组质粒pZHZ2只能被限制酶G、H切开
D.质粒pZHZ1,pZHZ2复制时一定会用到DNA聚合酶
A.基因工程的核心就是构建重组DNA分子
B.质粒pZHZ2上存在RNA聚合酶结合的位点
C.重组质粒pZHZ2只能被限制酶G、H切开
D.质粒pZHZ1,pZHZ2复制时一定会用到DNA聚合酶
为了形成稳定突变,需从重组克隆宿主(E.coli)中构建Pseudomonas aeruginosa的基因文库,并把该基因文库中克隆的突变基因转入一野生型组织。用已知的接合和质粒不相容性知识设计一方案。
A.引入某些限制酶切位点
B.人工构建载体
C.增加调控元件
D.调整阅读框
E.通过接头引入与目的基因相同的限制酶位点,并对目的基因相应酶切点进行甲基化修饰保护,可保护目的基因不受限制酶破坏
质粒pHUBI DNA是双链环状,长5.7kb(5.7×103个碱基对)。这个质粒带有某基因,它的蛋白质产物使宿主细菌对四环素具有抗性(Tet-r)。该DNA对下列每种限制酶具有一个识别位点:EcoRI、HpaI、BamHI、PstI、SalI、BglII。在BarnHI和SalI位点处克隆会破环四环素抗性;在其他酶的位点处克隆则保留四环素抗性。用各种限制酶以及酶混合物消化可得到如表16-2-11所列的DNA片段。试在pHUBIDNA图上标出所有这些酶的切点。将DNA图画成环形,在圆周上以5.7kb总长标出刻度。
表16-2-11 | |
酶混合物 | 片段长度(kb) |
EcoRI EcoRI,BamHI EcoRI,HpaI EcoRI,SalI EcoRI,BglII EcoRI,PstI PstI,BglII BglII,HpaI | 5.7 0.4,5.3 0.5,5.2 0.7,5.0 1.1,4.6 2.4,3.3 1.3,4.4 0.6,5.1 |
如图4表示运用基因工程技术生产胰岛素的三条途径。据图结合所学知识回答下列问题:
(1)为了便于将含有目的基因的细胞筛选出来,所选择的质粒上应该具有__________。(3分)
(2)培育转基因羊的过程中,科研人员通过感染或技术将重组质粒M转移到受体细胞A中,受体细胞A应该是__________细胞。③过程中还用到了__________技术。(6分)
(3)受体细胞B应该是莴苣的__________(填“体细胞”“卵细胞”或“受精卵)。导人该细胞后,需对该细胞进行培养,经__________过程形成愈伤组织。(4分)
(4)莴苣为双子叶植物,过程②常用的方法是__________;过程⑥常用的方法是用__________来处理大肠杆菌。使其易于吸纳重组质粒M。(2分)
(1)画出该质粒的酶切图谱,标明抗性基因的位置和酶切位点。 (2)如用HindⅢ切割未标记的上述DNA片段,得到5.5 kb和2.5 kb两段。如果在EcoRⅠ的3.5 kb酶切片段上没有HindⅢ切点,则用双酶(EcoRⅠ+HindⅢ)切割后会得到什么样的片段?
A.从蓝色矮牵牛细胞获得基因
B.连接基因B与质粒的酶为限制酶
C.用普通玫瑰细胞作受体细胞
D.培养过程需要运用组织培养技术
在DNA重组技术中,催化重组DNA分子形成的酶
A.DNA聚合酶I
B.Klenow片段
C.连接酶
D.末端转移酶
E.限制性内切酶
A.同聚尾法连接效率高,且易回收插入的片段
B.不匹配的黏性末端可通过部分填补后连接
C.限制酶切割DNA后加入EDTA-SDS终止液抑制限制酶活性,将有利于重组连接
D.平末端连接时,在反应体系中加入适量凝聚剂可提高连接效率
E.Mg2+/ATP是T4DNA连接酶反应时的必要因素